Tema: Exploración
de nuevas herramientas seroepidemiológicas: efecto de diferentes condiciones de
almacenamiento sobre la estabilidad longitudinal de portaobjetos de microarrays
que comprenden antígenos de influenza A, sarampión y Streptococcus
pneumoniae.
Objetivo: Desarrollar
ensayos para la detección de enfermedades sindrómicas.
Muestra biológica: Antígenos del virus del Streptococcus pneumoniae.
Tipo de ácido
nucleico: Polisacáridos capsulares purificados de Streptococcus pneumoniae.
Gen
o secuencia a amplificar: Serotipo 14.
Tipo
de PCR: Hibridación, microarray.
Pasos
en las condiciones de almacenaje:
Todas las
diapositivas se almacenaron en condiciones oscuras. La estabilidad de las
diapositivas de microarrays manchados se evaluó en las siguientes cuatro
condiciones de almacenamiento:
-Temperatura
controlada, desecada (de aquí en adelante abreviada 'TC_D'): los portaobjetos
se almacenaron en una cámara de desecación colocada en una sala con temperatura
controlada (temperatura promedio de 21 ° C).
-Congelado a
-20 ° C, desecado (abreviado 'Congelado'): Los portaobjetos se
almacenaron en cajas de plástico individuales que contenían sobres de sílice y
se sellaron en bolsas de plástico antes de la congelación.
-37 ° C,
desecado (abreviado '37C'): los portaobjetos se almacenaron en una caja de
plástico oscura que contenía sobres de sílice y se almacenaron en una incubadora a 37 ° C.
-Temperatura
ambiente, no desecada (RT_ND abreviado). Como esta era la única condición
de almacenamiento para la cual la temperatura y la humedad no estaban
controladas, registramos la temperatura diaria en grados Celsius (C) y la
humedad relativa (RH) expresada en porcentajes (Lascar Electronics, Easy Log
USB, versión 7.2.0.0) sobre un período de aproximadamente 16 meses (los datos
se registraron entre el 24 de octubre de 2012 y el 16 de enero de 2013, así
como entre el 19 de marzo de 2013 y el 21 de febrero de 2014, respectivamente).
Línea
de tiempo del experimento. El período de estudio abarcó un total de 22
meses. Las pruebas periódicas de diapositivas de microarrays manchados se
realizaron en un intervalo de 2 meses. Por punto de tiempo de prueba, se
probaron cuatro diapositivas, una diapositiva por condición de almacenamiento,
simultáneamente. La temperatura y la humedad relativa se registraron
(indicadas por bloques grises) durante parte del estudio para la condición
'Temperatura ambiente, no desecada'.
Estabilidad de
virus (virus de la gripe A y sarampión) y antígenos bacterianos (S. pneumoniae) impresos en portaobjetos de microarrays almacenados en cuatro
condiciones diferentes de temperatura y humedad. La estabilidad del
antígeno se evaluó mediante pruebas periódicas utilizando alícuotas de
grupos de suero específicos a
intervalos de dos meses (eje x) que cubren un período total de estudio de 22
meses. Los títulos de Log2 se muestran en el eje y. Los paneles
horizontales representan diferentes condiciones de almacenamiento por
antígeno. Las líneas de color muestran el título mediciones por antígeno y
condiciones de almacenamiento. Las líneas horizontales, punteadas y negras
corresponden a los títulos geométricos medios respectivos. Las mediciones
fueron aceptables si permanecían dentro de un rango de más / menos un paso de
dilución del log2-titer medio. Las cintas grises muestran un intervalo de
confianza del 95% alrededor de una línea de regresión lineal invisible para
indicar tendencias en la estabilidad del antígeno a lo largo del
tiempo. Las mediciones basales (prueba 0) se combinan en una sola marca.
Referencias bibliográficas:
- Freidl G, Bruin E, Schipper M, Koopmans M. Exploring novel sero-epidemiological tools—Effect of different storage conditions on longitudinal stability of microarray slides comprising influenza A-, measles- and Streptococcus pneumoniae antigens. Journal of Virological Methods [Internet]. 2017 [cited 3 December 2017];245:53-60. Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0166093416305213
- Aman M. LIBRO DE APOYO DIDACTICO EN BIOLOGIA MOLECULAR FCM UCE marzo 2015 [Internet]. Joomag. 2015 [cited 25 November 2017]. Available from: https://view.joomag.com/libro-de-apoyo-didactico-en-biologia-molecular-fcm-uce-marzo-2015/0169164001409963499?short
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