Técnica de Edición Genómica en la Neumonía

Tema: Polimorfismos de los genes "FER Y FoxO3": papel en la susceptibilidad, gravedad y pronóstico de la neumonía adquirida en la comunidad.

Los pacientes frecuentes de enfermedades neumocócicas invasivas, presentan deficiencia de una kinasa asociada al receptor de IL-1 (IRAK-4) y de MyD88 (55,56). Los pacientes con estas IDP presentan una alta susceptibilidad a la infección diseminada por S. pneumoniae, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. 
Los determinantes genéticos de la respuesta del huésped a la infección que desempeñan un papel en la susceptibilidad a la neumonía son FOXO3 y FER. Su estudio contribuye a superar las limitaciones de los actuales modelos clínicos de predicción de riesgo en la neumonía adquirida en la comunidad.

Con este antecedente se estudiaron diferentes grupos de pacientes con NAC para determinar los polimorfismos en los genes mencionados.

Para el gen FER, se estudian dos polimorfismos, rs4957796 (cromosoma 5:109066439T>C) y rs62375529 (cromosoma 5: 109081631T>C), ambos intrónicos y en alto desequilibrio de ligamiento (D´=1 y r2= 0´8), mientras que para el gen FOXO3 el estudio se centró en un SNP sinónimo (no codificante) también intrónico en FOXO3A denominado rs12212067 (cromosoma 6: 108981196T>G).

Resultados:

• El estudio de los genes ayudará a identificar vías patogénicas y descubrir las bases moleculares de la respuesta a los fármacos (farmacogenética).
• Los genes pueden representar, en un futuro próximo, una diana en el tratamiento (terapia génica).

Referencia bibliográfica:

1. Valencia-Gallardo J. Polimorfismos de los genes "FER Y FoxO3": papel en la susceptibilidad, gravedad y pronóstico de la neumonía adquirida en la comunidad [Internet]. Tdx.cat. 2017 [cited 23 December 2017]. Available from: http://www.tdx.cat/handle/10803/394211
2. La tesis como tal no se cito primero porque se demora en cargar el link, por eso esta citada en un compendio de tesis doctorales en red. La información completa de la tesis se encuentra en el siguiente link. https://acceda.ulpgc.es/bitstream/10553/18427/2/0727204_00000_0000.pdf

Terapia con Stem Cells en Neumonía

¿Cómo se dirigen las células madre a los pulmones?

Cuando algo, como medicamentos, sangre o células madre, se presenta a su cuerpo a través de una vía intravenosa, va directamente al lado derecho del corazón. Dentro de un latido de corazón o dos, se empuja directamente a los pulmones. Entonces su sangre distribuye el artículo por todo el cuerpo. Sin embargo, este proceso cambia un poco cuando se trata de células madre. Durante los estudios realizados para los Institutos Nacionales de la Salud (NIH), los investigadores encontraron que las células madre atraviesan este proceso, pero quedan atrapadas cuando llegan a los pulmones. Esto se conoce comúnmente como la trampa pulmonar, y aunque puede no ser una buena noticia para alguien que desea ver esas células moverse por todo el cuerpo, es una ocurrencia feliz para aquellos que buscan ralentizar la progresión de una enfermedad pulmonar crónica.

Tema: El trasplante de células madre mesenquimatosas alogénicas compactas derivadas de hueso atenúa la gravedad del síndrome de neumonía idiopática en un modelo de trasplante de médula ósea murina.

Tipo de Stem Cells: Células madre mesenquimatosas derivadas de hueso compacto.

Método de obtención: Obtenidas de ratones C57BL/6 (fecundación in vitro) utilizando tratamiento de colagenasa.

Resultados: El cotransplante de CB-MSC atenuó significativamente la gravedad de las lesiones pulmonares y aumentó la tasa de supervivencia de los ratones en comparación con los ratones no cotransplantados. Un mayor porcentaje de Treg, la reducción de los niveles de TNF-α, IFN-γ, CCL5, CXCL9 y CXCL10, la regulación negativa de CXCR3 y CCR5, así como la regulación positiva de CCR7, se observaron en los ratones de cotrasplante de MSCs. Además, el efecto profiláctico de las CB-MSC se asoció con un cambio del equilibrio Th1 / Th2 hacia la polarización Th2 antiinflamatoria.

Referencias bibliográficas:

1. Lung Institute | Stem Cell Treatment Basics [Internet]. Lung Institute. 2017 [cited 17 December 2017]. Available from: https://lunginstitute.com/treatment/stem-cell-treatment-basics/
2. Qiao SK e. Allogeneic Compact Bone-Derived Mesenchymal Stem Cell Transplantation Attenuates the Severity of Idiopathic Pneumonia Syndrome in a Murine Bone Mar... - PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2016 [cited 17 December 2017]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28006781

ADN Recombinante en la Neumonía

ADN recombinante en la naturaleza.

En la naturaleza se generan transgénicos, aunque en tiempos prolongados. Por ejemplo, determinados agentes infecciosos incorporan material genético al genoma de su huésped, como lo hace la bacteria Agrobacterium Tumefaciens desde hace millones de años con los vegetales que infecta.

Con la  "colonización genética" se obliga a las planta a fabricar una sustancia de la que solo se puede nutrir esta bacteria, (Agrobacterium Tumefaciens). La bacteria es atraída por sustancias que excreta la planta en sus zonas abiertas por pequeñas heridas. Por allí se introduce, y es entonces cuando transfiere a la célula vegetal un trozo de su material genético: una porción de un plásmido (ADN extracelular cromosómico bactriano), que se integrará en alguna zona del genoma de la planta.

ADN recombinante artificial en la Neumonía.

Tema: Ingeniería genética o tecnológica del ADN recombianate.
Objetivo: Crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos.
Gen: Gen amp, Gen tet.

Enzima de restricción: Pstl, BamHI y Sall.

Enzima ligasa: No se específica.

Vector: Tipo cósmido
Célula receptora: Célula bacteriana.
Método de inserción del gen: Transformación.
Método de identificación: Electroforesis.

Referencias bibliográficas:

1. Román D. Ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante [Internet]. Ivu.org. 2017 [cited 3 December 2017]. Available from: https://ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html
2. Biologia i [Internet]. Google Books. 2017 [cited 3 December 2017]. Available from: https://books.google.com.ec/books?id=1R9FQ1xF3iEC&pg=PA84&lpg=PA84&dq=adn+se+recombina+de+forma+natural&source=bl&ots=KH4pzPh7Vt&sig=Bhu1PabBgwTqclmaZWCcbr8uDJY&hl=es&sa=X&ei=djG3UMawJbOq0AHSlIGADw#v=onepage&q&f=true

Prueba molecular (microarray) en la Neumonía

Tema: Exploración de nuevas herramientas seroepidemiológicas: efecto de diferentes condiciones de almacenamiento sobre la estabilidad longitudinal de portaobjetos de microarrays que comprenden antígenos de influenza A, sarampión y Streptococcus pneumoniae.

Objetivo: Desarrollar ensayos para la detección de enfermedades sindrómicas.

Muestra biológica: Antígenos del virus del Streptococcus pneumoniae.

Tipo de ácido nucleico: Polisacáridos capsulares purificados de Streptococcus pneumoniae.

Gen o secuencia a amplificar: Serotipo 14.

Tipo de PCR: Hibridación, microarray.

Pasos en las condiciones de almacenaje:

 Todas las diapositivas se almacenaron en condiciones oscuras. La estabilidad de las diapositivas de microarrays manchados se evaluó en las siguientes cuatro condiciones de almacenamiento:

-Temperatura controlada, desecada (de aquí en adelante abreviada 'TC_D'): los portaobjetos se almacenaron en una cámara de desecación colocada en una sala con temperatura controlada (temperatura promedio de 21  ° C).

-Congelado a -20  ° C, desecado (abreviado 'Congelado'): Los portaobjetos se almacenaron en cajas de plástico individuales que contenían sobres de sílice y se sellaron en bolsas de plástico antes de la congelación.

-37 ° C, desecado (abreviado '37C'): los portaobjetos se almacenaron en una caja de plástico oscura que contenía sobres de sílice y se almacenaron en una incubadora a 37 ° C.  

-Temperatura ambiente, no desecada (RT_ND abreviado). Como esta era la única condición de almacenamiento para la cual la temperatura y la humedad no estaban controladas, registramos la temperatura diaria en grados Celsius (C) y la humedad relativa (RH) expresada en porcentajes (Lascar Electronics, Easy Log USB, versión 7.2.0.0) sobre un período de aproximadamente 16 meses (los datos se registraron entre el 24 de octubre de 2012 y el 16 de enero de 2013, así como entre el 19 de marzo de 2013 y el 21 de febrero de 2014, respectivamente).

Línea de tiempo del experimento. El período de estudio abarcó un total de 22 meses. Las pruebas periódicas de diapositivas de microarrays manchados se realizaron en un intervalo de 2 meses. Por punto de tiempo de prueba, se probaron cuatro diapositivas, una diapositiva por condición de almacenamiento, simultáneamente. La temperatura y la humedad relativa se registraron (indicadas por bloques grises) durante parte del estudio para la condición 'Temperatura ambiente, no desecada'.

Estabilidad de virus (virus de la gripe A y sarampión) y antígenos bacterianos (S. pneumoniae) impresos en portaobjetos de microarrays almacenados en cuatro condiciones diferentes de temperatura y humedad. La estabilidad del antígeno se evaluó mediante pruebas periódicas utilizando alícuotas de grupos de suero específicos a intervalos de dos meses (eje x) que cubren un período total de estudio de 22 meses. Los títulos de Log2 se muestran en el eje y. Los paneles horizontales representan diferentes condiciones de almacenamiento por antígeno. Las líneas de color muestran el título mediciones por antígeno y condiciones de almacenamiento. Las líneas horizontales, punteadas y negras corresponden a los títulos geométricos medios respectivos. Las mediciones fueron aceptables si permanecían dentro de un rango de más / menos un paso de dilución del log2-titer medio. Las cintas grises muestran un intervalo de confianza del 95% alrededor de una línea de regresión lineal invisible para indicar tendencias en la estabilidad del antígeno a lo largo del tiempo. Las mediciones basales (prueba 0) se combinan en una sola marca.

Referencias bibliográficas:

1. Freidl G, Bruin E, Schipper M, Koopmans M. Exploring novel sero-epidemiological tools—Effect of different storage conditions on longitudinal stability of microarray slides comprising influenza A-, measles- and Streptococcus pneumoniae antigens. Journal of Virological Methods [Internet]. 2017 [cited 3 December 2017];245:53-60. Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0166093416305213
2. Aman M. LIBRO DE APOYO DIDACTICO EN BIOLOGIA MOLECULAR FCM UCE marzo 2015 [Internet]. Joomag. 2015 [cited 25 November 2017]. Available from: https://view.joomag.com/libro-de-apoyo-didactico-en-biologia-molecular-fcm-uce-marzo-2015/0169164001409963499?short